摘要：通过对基因AtKIX8启动子的克隆以取得启动子-GUS转基因报告植株，进一步为检测其作用位置使用GUS组织化学染色检查该启动子，并使用荧光定量PCR解析该启动子对冷胁迫和外源激素的反应，以探究拟南芥器官形态调控基因AtKIX8的如何进行表达，为更进一步探究该基因的功能及作用机制指明方向。实验探明本基因启动子可引导基因GUS在幼苗茎尖顶端分生组织及其周缘部分，成年植株的茎以及主叶脉中特异表达。研究发现较低的温度与外界的生长素处理，能显著提高该启动子驱动下的GUS蛋白表达量。证明AtKIX8基因启动子在拟南芥中具有组织特异性的表达模式，并受到低温与外源生长素的诱导。
关键词：拟南芥；AtKIX8基因；启动子；克隆；表达分析
Abstract : A promoter-GUS transgenic reporter plant was obtained by cloning the AtKIX8 promoter, and the promoter was further examined by GUS histochemical staining to detect its position. The promoter was used to analyze the promoter against cold stress and foreign matter using real-time quantitative PCR. The response of source hormones to explore the expression pattern of AtKIX8, an organ size-regulated gene in Arabidopsis, will point the way to further explore the function and mechanism of this gene. The experiment proved that the promoter of the gene induces the GUS gene to express specifically in the stem apical meristem of seedlings, and in the stem and leaf of the adult plant. Low temperature and auxin treatment can significantly increase the expression of GUS gene. The Arabidopsis AtKIX8 gene promoter has a tissue-specific expression pattern and is induced by cold temperature and circumphere auxin.
Keyword: Arabidopsis thaliana; AtKIX8 gene; promoter; clone; expression analysis;
目 录
引言 3
1 材料和方法 3
1.1 材料 3
1.2 方法 4
1.2.1 拟南芥AtKIX8基因启动子序列预测分析 4
1.2.2 拟南芥AtKIX8基因启动子克隆及植物表达载体构成 4
1.2.3 拟南芥培养及基因转化筛选 5
1.2.4 转基因植株的GUS组织化学染色 5
1.2.5 转基因植株处理实验及实时荧光定量PCR 5
2 实验结果与分析 6
2.1 拟南芥AtKIX8基因预测启动子的序列分析 6
2.2 拟南芥AtKIX8基因启动子的克隆 7
2.3 植物表达载体pKIX8::GUS构建及农杆菌转化 8
2.4 拟南芥AtKIX8基因表达模式检测 9
2.5 拟南芥AtKIX8基因启动子对植物激素和低温胁迫的响应 10
3 讨论 11
参考文献 12
感谢 14
引言
KIX蛋白家族成员中11个成员的N-末端都具有保守KIX结构域[1],该蛋白家族成员亦包含了拟南芥AtKIX8（At3g24150）基因编码产物，研究发现KIX结构域也许介导了与转录因子活化域的互作[2]，曾有实验称含有KIX蛋白结构域的CBP/p300和MED15蛋白分别参与了开花时间调控[3]和水杨酸信号响应[4]，而最近的实验推想该基因参加了植物器官大小与形态的生长调节控制[5]。植物器官形态调节控制于生活生产中的应用远景很广阔，于探究植物形貌外观、生活繁殖、胁迫抗性等素质的遗传也具有重大的指导意义，而如今对KIX蛋白在拟南芥器官大小调控中的功能作用依然不甚明确，同时还没有对其启动子以及基因调控、表达模式的研究报导。要更深层探明此基因的功能，需要对AtKIX8启动子及它的表达模式展开研究。运用线上程序PlantCARE可以对基因启动子区所包含的结构元件作出合理预测[6]，预测的调控元件大多能反应外界信号，例如TGA-1与AuxRE受到外源生长素之诱导作用[7-8]；DRE/CRT是拟南芥干旱和低温胁迫诱导元件[9]；ABRE元件可以响应干旱胁迫中ABA的应答......[10]经过实验的验证，能更深层地解析其表达和调控模式。 拟南芥调控基因AtKIX8启动子的克隆和表达分析:http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_206531.html