TSA培养基灭菌后,温度降至50-60℃左右,倒入90 mm平板中,冷却凝固备用;称取适量XLD培养基,用去离子水溶解后,加入转子,用封口膜将其封口后放置于磁力搅拌加热器上进行搅拌加热,当培养基沸腾1min左右停止加热。室温冷却至50-60℃左右倒入平板中冷却凝固备用。
用磷酸二氢钠和去离子水,配制PBS缓冲液A液;适量十二水和磷酸氢二钠溶解,配制PBS缓冲液B液;然后A液和B液按相应体积比混合,调节其PH值为7.2,每管4.5 mL分装后(以下称稀释管),121℃灭菌15 min,冷却备用;
非酸处理:取0.5 mL活化后菌液加入4.5mL盐水管中进行稀释,菌浓度为108。再进行十倍梯度稀释,至菌体浓度达到102,为保证菌落计数符合范围,选取102、103、104浓度,分别取100 µL涂布于TSA平板,每种菌设6个重复,每个浓度两个平行,37℃培养20-24 h。取出,计出平板上的菌落数,得出非酸处理菌株在培养基平板上的生长情况。
酸性应激处理:取0.5 mL活化后菌液加入4.5 mL盐水管,菌浓度为108。取出0.5 mL加入4.5 mL PH3 TSB管中,每种菌共配制20管体积为5 mL的菌液。分别在37℃中进行4个时间点(1 h、1.5 h、2 h、3 h)培养,每个时间点设5个重复。培养终止后取出,进行10倍梯度稀释(10-1、10-2、10-3、10-4),为确保计数结果处于有效范围,本试验中采用的涂布稀释梯度为10-2、10-3、10-4,各取100 µL分别涂布于TSA平板,每个浓度接种两个平板作为平行,37℃中培养20-24 h。利用菌落计数仪进行计数,得出在酸性(PH=3)条件下处理的菌株在TSA培养基平板上的生长情况。
1.3.3 沙门氏菌的氧化应激试验
试验准备:30克TSB培养基溶于1000 mL去离子水中,混匀后将其分装至10 mL离心管中,每管6-8 mL(作为TSB管);将配制的0.9%的生理盐水每管分装4.5 mL到10 mL离心管中(作为盐水管);TSB液体培养基、TSA培养基等,121℃高温灭菌15分钟备用。用30%双氧水和灭菌后冷却的TSB液体培养基,配制成 2 mmol/L H2O2 TSB培养基,分装至10 mL离心管(以下为H2O2 TSB管),每管4.5 mL。
耐受环境应激多样性的研究(4):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_205988.html