摘要：目的：阐述姜黄素对肝癌细胞HepG2的毒性、凋亡影响，初步探讨姜黄素诱导细胞凋亡的机制。方法：HepG2细胞用不同浓度的姜黄素（0、6.25、12.5、25、50、100mol/L）处理后，采用cck-8法检测细胞的存活率，利用Western-blot测PARP、JNK与P-JNK的蛋白水平、Caspase-3酶活性。结果：1、CCK-8实验结果显示,25mol/L以上浓度的姜黄素处理24h对细胞产生明显毒性作用,细胞存活率降低；2、25mol/L浓度姜黄素处理24h后， Western-blot结果显示PARP降解片段的水平升高，荧光法检测显示Caspase-3酶活性水平升高，提示姜黄素诱导细胞凋亡；3. Western-blot结果显示，姜黄素处理24h后，与对照组相比，6.25、12.5、25mol/L浓度处理后JNK与P-JNK水平均呈现上升趋势，提示姜黄素通过该通路诱导凋亡。结论：姜黄素降低HepG2肝癌细胞活性，诱导细胞凋亡的发生，可能与JNK信号通路的激活有关。

关键词：姜黄素；肝癌；细胞凋亡；凋亡机制

Objective: To elucidate the effects of curcumin on the cytotoxicity and apoptosis of HepG2 cells, and to explore the mechanism of apoptosis induced by curcumin. Methods: HepG2 cells were treated with different concentrations of curcumin (0、6.25、12.5、25、50、100mol/L), using cck-8 cell survival assay, using Western-blot test PARP, JNK and P- JNK protein levels, Caspase-3 enzyme activityassay. Results:

1. The results of CCK-8showed that the curcumin concentration above 25mol/L for 24h had obvious toxic effects on the cells, and the cell survival rate was decreased;2. After 25mol/L curcumin treatment for 24h, Western-blot The results showed that the level of PARP-degraded fragment was increased. Fluorescence assay showed that the level of Caspase-3 enzyme activity increased, suggesting that curcumin induced apoptosis; 3. Western-blot results showed that after curcumin treatment for 24h, compared with the control group The levels of JNK and P-JNK increased after treatment with 6.25、12.5 and 25mol/L, suggesting that curcumin induces apoptosis through this pathway.Conclusion: Curcumin reduced hepatoma HepG2 cell activity, induction of apoptosis occurs, a signal may be associated with activation of JNK pathway.

Keywords: curcumin;liver cancer;apoptosis;apoptosis mechanism.

目录

引言 4

1材料与方法 6

1.1主要试剂 6

1.2主要设备 6

1.3试剂配制 6

1.4实验方法 7

1.5统计分析 11

2结果 11

2.1 细胞毒性CCK-8实验 11

2.2 细胞凋亡western blot实验 12

2.2.1 PARP蛋白表达水平 12

2.2.2 Caspase-3酶活性检测 12

2.2.3 JNK与P-JNK蛋白表达水平 13

3讨论 13

参考文献 15

致谢 17

引言

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全世界最常见的恶心肿瘤之一，高死亡率是肝癌的主要特点，有数据显示其死亡案例约占全球癌症死亡病例的10%左右，在亚洲、非洲等一些国家的发病率较高。由于肝癌的前驱期很长，病情发展较为迅速，一旦确诊治愈率非常低，并且一旦确诊恶性发展程度高，一般生存年限5年左右，对人类的生命健康造成了严重的威胁。谈及癌症就会让人产生害怕的感觉，因为依据目前的医疗水平来说，治疗癌症是遥不可及的，我们的医疗事业任重而道远，需要更多的实践经验、科研成果、临床研究去寻找癌症的救治方案。截至2008年，HCC的发病率增长了一倍多，而我国的HCC新发病例就占了全球的50%以上[1]。据WHO组织报告，每年死于肝癌的就占了约100万人，而我国是肝癌发病率最高的国家，作为世界癌症中第3大死因，肝癌严重影响着我们人类的健康。据相关的调查显示，我国在2008年的癌症死亡调查中死因排在第一位的就是肝癌，并且每一万人口中就有约3人死于肝癌。肝癌术后1年复发率约40％，肝癌术后5年生存率仅18.4％。作为我国的病死率很高的难治性恶性肿瘤，在亚洲和非洲的大部分地区感染率较高，从我国2005年实行免费疫苗的接种后，我国的患病率得到有效的下降。 姜黄素对HepG2肝癌细胞凋亡的影响研究:http://www.chuibin.com/yixue/lunwen_206181.html