2.4清除剂处理后转化子中ROS含量的变化 10

2.5清除剂处理后转化子中灵芝酸含量的变化 10

3讨论 11

致谢 12

参考文献 12

灵芝bHLH型转录因子GL30684对灵芝酸生物合成的调控研究

引言 灵芝[Ganoderma lucidum (Curtis: Fr.) Karst]隶属于真菌门（Eumycota）、担子菌亚门（Basidiomycotina）、层担子菌纲（Hymenomycetes）、无隔担子菌亚纲（Holobasidiomycetidae）、非褶菌目（Aphyllophorales）、灵芝菌科（Ganodermataceae）、灵芝属（Ganoderma）[1]。灵芝又别称“瑞芝”、“仙草”，是一种药食两用真菌[2]。我国最早的药物专著《神农本草经》将灵芝列为上品，可以使人“轻身不老”。中国药典2010版一部也将紫芝（Ganodermasinense）的干燥子实体收载于灵芝项下。灵芝药材性平、味甘，归心、肺、肝、肾经；具有补气安神、止咳平喘的功效；用于心神不宁、失眠心悸、肺虚咳喘、虚劳短气、不思饮食。现代药理学研究显示灵芝提取物具有抗肿瘤、抗病毒、保肝、调节免疫、降血糖、降血压和改善睡眠等作用[3]。而且灵芝对于慢性支气管炎、冠心病、糖尿病、神经衰弱等疾病都有一定的疗效[4]。

灵芝三萜，又称灵芝酸，是灵芝主要的药用成分之一。灵芝酸含量的多少是目前衡量灵芝质量高低的重要指标。在目前灵芝合成灵芝酸的量比较低的情况下，通过外源的环境因子诱导灵芝酸的合成，将是一种有效地提高灵芝酸含量的手段。茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)被认为是一种信号分子，能诱导许多植物的生理反应[5]。经研究发现茉莉酸甲酯能显著提高灵芝酸含量并上调灵芝酸生物合成途径中的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼酯焦磷酸合成酶和羊毛甾醇合成酶等基因的表达[6]。

bHLH（basic helix-loop-helix）型转录因子广泛分布于真核生物中，参与转录调控。动物bHLH 转录因子包含45个家族，分别参与调控神经元发生、肌细胞生成、肠组织发育以及环境毒素响应等生物学过程。bHLH类转录因子是植物中最大的转录因子家族之一，具有重要的生物学功能[7]。在植物中，bHLH型转录因子在类黄酮、生物碱和萜类等生物合成途径中起重要的调控作用[8]。在红豆杉中，bHLH型转录因子可与紫杉醇通路相关基因的启动子结合进而激活启动子，从而提高紫杉醇的合成量。故了解bHLH型转录因子对灵芝中灵芝酸合成的调控作用，能够更好地发挥灵芝的食用和药用作用，具有重要意义。

真菌bHLH转录因子的相关研究非常少，已知转录因子能够调节酵母体次生代谢产物的合成[9]。本研究以灵芝bHLH型转录因子为研究对象，初步探究该类转录因子在灵芝三萜生物合成的调控中的生物学作用，从而为进一步研究灵芝的生长代谢提供基础的理论依据。

1实验材料与方法

1.1实验材料

1.1.1菌种

灵芝菌丝菌株上海农科院G20（南京农业大学应用真菌实验室保存）。

1.1.2培养基

PDA培养基（液体）：去皮马铃薯200 g、葡萄糖20 g，定容1 L，115 ℃灭菌30 min。 灵芝bHLH型转录因子GL30684对灵芝酸生物合成的调控研究(2):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_206475.html