本研究主要针对缺钾胁迫下或全素处理下，对烟草不同叶位分别涂抹2%硝酸钾或蒸馏水，探究钾素在不同叶位间的变化情况。其次，使用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测法初步探索钾转运体基因TPK1在叶位间的表达[18]。

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．1．1 供试材料 本实验中选取的烟草种子为MS K326烟草催芽包衣种子。供试钾溶液为2% KNO3溶液。

1．1．2 实验仪器与试剂 TaKaRa Mini BEST Plant RNA Extraction Kit试剂盒，TAKARA PrimeScript™ RT试剂盒，TAKARA SYBR® Premix Ex Taq™试剂盒，都购自TAKARA公司。引物由上海金唯智生物有限公司合成，其他化学物质为分析纯。主要仪器是OD-1000+Sepctrophotometer，原子吸收分光光度计，荧光定量PCR仪，PCR仪。

1．1．3 水培全素营养液 水培营养液为Hoagland 全素营养液，各元素质量浓度为2.5 mM Ca(NO3)2、2.5 mM KNO3、l.0 mM MgSO4、0.5 mM KH2PO4、20 μM Fe-EDTA、4.6 μM H3BO3、0.32 μM CuSO4、0.71 μM ZnSO4、11.1 μM MnCl2、0.38 μM H2MoO4。

1．1．4 水培缺素培养液 缺钾培养条件下，将KNO3替换为NaNO3，KH2PO4替换为NaH2PO4。

1．2 试验方法

1．2．1 烟草培养方法 蛭石于121℃条件下高压蒸汽灭菌2小时，将烟草种子撒播于已灭菌的蛭石中，在黑暗的室温条件下萌发。待烟草幼苗长至二叶一心期时，用海绵将其固定在有孔的黑色塑料板上，置于盛有Hoagland营养液的1 L塑料杯上培养，烧杯外壁粘有黑色贴纸进行遮光处理。随水培时间的延长增加营养液的浓度，水培1-6天、7-10天、11-13天及14天后分别使用1/8、1/4、1/2以及完全的营养液，用HCl或KOH溶液将营养液pH调至5.8。

1．2．2 缺钾组处理方法 设置2组实验组，每组3盆，每盆3棵。使用缺素培养液培养烟草植株，待缺素症状出现后，作相应的叶位标记并分别对烟草的上位叶或中位叶或下位叶的叶表皮涂抹约0.5ml的2% KNO3 溶液或者蒸馏水，叶位标记操作与符号见表1。一周后，作相同的涂抹处理，并在3天后采样收集烟草叶位样品，同时采集烟草不同叶位样品100mg于-70℃保存。

1．2．3 全素培养组处理方法 设置2组全素培养组，每组3盆，每盆3棵。在进行实验组处理的同时进行对照组处理。使用全素培养液培养烟草，处理相同时间，并作相同的涂抹处理与采样。

表1 叶位标记操作与符号

符号 含义

A 缺钾胁迫下，对不同叶位涂抹2%硝酸钾溶液

B 全素处理下，对不同叶位涂抹2%硝酸钾溶液

C 缺钾胁迫下，对不同叶位涂抹蒸馏水

D 全素处理下，对不同叶位涂抹蒸馏水

1 上叶位 缺钾胁迫下烟草不同叶位间钾离子的吸收与转运(3):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_206473.html