1  材料与方法

1．1  材料与仪器

1．1．1  实验材料    供试材料经江苏省中国科学院植物研究所周义峰副研究员鉴定为兰科白及Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.的干燥块茎，打粉过40目筛后使用；25KU多酚菌菇氧化酶，上海源叶生物科技有限公司；多巴胺盐酸盐，上海源叶生物科技有限公司；无水乙醇，分析纯，广东光华科技股份有限公司；十二水合磷酸氢二钠，二水合磷酸二氢钠均为分析纯，广东光华科技股份有限公司；盐酸，氢氧化钠，均为分析纯，南京化学试剂有限公司；焦性没食子酸，分析纯，上海瑞永生物科技有限公司；L(+)-抗坏血酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司。

1．1．2  实验仪器    紫外分光光度仪077414070003，上海仪电分析仪器有限公司。

1．2  实验设计

1．2．1  浸提    白及中多种成分都被证实具有抗氧化活性，因此本实验将白及作为一个整体，通过浸提的方法得到待测液，以此为基础来进行研究。测定浸提白及时最适于发挥白及抗氧化活性的乙醇浓度，分别使用去离子水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇浸提白及粉末。

1．2．2  抗氧化性测定    分别测定各提取液的DPPH清除率、氧自由基清除率、酪氨酸酶抑制率，得出白及浸提液抗氧化性强弱。

1．2．3  热稳定性考察    精密量取10mL浸提液和阳性对照品于具塞锥形瓶中，称重，冰箱4℃冷藏、20℃水浴、40℃水浴、80℃水浴、沸水浴各3h，取出使其恢复至常温，用相应浓度乙醇补足重量。过滤，分别测定其DPPH清除率、氧自由基清除率及L-酪氨酸酶抑制率。

1．2．4  酸碱破坏实验    （1）精密量取10mL浸提液和维生素C溶液分别于20mL容量瓶中，加入1mol/L盐酸1mL，混匀、静置15min，加入1mol/L氢氧化钠1mL进行中和，再加入1mL水，用相应浓度乙醇定容至刻度。（2）精密量取10mL浸提液和维生素C溶液分别于20mL容量瓶中，加入1mol/L氢氧化钠1mL，混匀、静置15min，加入1mol/L盐酸1mL中和，再加入1mL水，用相应浓度乙醇定容至刻度。分别测定其DPPH清除率、氧自由基清除率及酪氨酸酶抑制率。

1．3  测定项目及方法

1．3．1  浸提    分别用去离子水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇，各80mL于50℃水浴加热1.0g白及粉末4h，过滤，定容至100mL待测。之后的研究中以现在被作为添加剂广泛运用于化妆品中的维生素C作为阳性对照，使用10mg/mL的维生素C来进行测定。

1．3．2  DPPH清除率测定    取1mL不同浓度乙醇提取的浸提液和1mL 0.1mmol·L-1的DPPH，混匀，于暗处静置30min，测定519nmOD值[6]。根据吸光度计算待测液的DPPH清除率。

1．3．3  氧自由基清除率测定    白及浸提液的氧自由基清除率通过邻苯三酚自氧法进行测定[7]。

1．3．4  酪氨酸酶抑制率测定    配置pH为6.8的PBS缓冲液，用PBS缓冲液配置0.02g/mL的酸溶液。精密移取测试样，混合均匀，于水浴37℃条件下加热反应10min，迅速加入100μL酪氨酸溶液，混合均匀，再于水浴37℃条件下加热反应，分别在反应5min、10min、20min时测定在475nm处吸光度，根据得到的吸光度计算得出待测液的酪氨酸酶抑制率。

2  结果与分析

2．1  浸提白及的最佳乙醇浓度分析

结果表明，用70%的乙醇溶液进行浸提时，能最大程度发挥出白及的抗氧化活性。从图1可知，白及浸提液的DPPH清除率随着浸提使用的乙醇浓度的上升而上升，当浸提所使用乙醇溶液浓度达到70%时达到DPPH清除率最大值72.73%，之后变化趋势减小，并且略有下降。相同条件下维生素C溶液的DPPH清除率为98.21%，高于白及浸提液的DPPH清除率。从图2可知，同样是用70%的乙醇浸提白及，可以使浸提液的氧自由基清除率达到最高值，为15.47%。相同条件下维生素C溶液的氧自由基清除率为98.19%，高于白及浸提液的氧自由基清除率。从图3可知，白及浸提液的酪氨酸酶抑制率随浸提所用乙醇浓度的上升先上升后下降，使用70%乙醇浸提的浸提液反应5min，可使浸提液的酪氨酸酶抑制率达到最大值，为61.65%，与相同条件下维生素C溶液的酪氨酸酶抑制率66.80%相近。根据图3可知，白及浸提液以及维生素C溶液的酪氨酸酶抑制率均随反应时间的延长而呈下降趋势，因此进行白及浸提液稳定性实验测定白及对酪氨酸酶的抑制率时，选定5min作为反应时间。 白及抗氧化活性的稳定性研究(2):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_206229.html