菌饼制作：用打孔器打制菌饼（直径为0.5cm）后，用牙签或者接种环将菌饼接种到新的培养皿（PDA）中央，随后放入培养箱中。注意不同的菌之间应更换牙签或者重新灼烧接种环与打孔器，避免交叉污染；打制菌饼时，应选取菌丝外圈1/3处打制，所得菌饼作为供试菌饼；上述操作均在灭过菌的超净工作台中进行。

1.4 β-咔啉酰胺及酰肼类衍生物的抗细菌活性测定

1.4.1抑菌圈的测定

滤纸片的制备：用打孔器将滤纸打制成直径为0.5cm的小圆片，放在干净的玻璃培养皿内，121ºC高压灭菌后放在60ºC烘箱内烘干备用。

采用滤纸片法测定β-咔啉酰胺及酰肼类衍生物的抗细菌活性。先将小圆片浸泡于待测化合物溶液（浓度为1×104ug/mL）中备用，将5mL菌液加入到100mL培养基中，充分混匀后倒平板。然后将含药小圆片取出贴于平板上，置于培养箱（28ºC）培养。最后观察抑菌圈的透明度并测量抑菌圈直径。透明度分为三个等级，仅能观察到抑菌圈的存在但不清晰用一个加号表示；可清晰观察到抑菌圈但不是很透明用两个加号表示；抑菌圈非常清晰透明则用三个加号表示。

1.4.2最小抑菌浓度（MIC）的测定

待测化合物的制备：使用微量天平各称取10种化合物10mg，用二甲亚砜试剂配成1×104ug/mL的母液，稀释成1×103ug/mL，过滤灭菌后备用。

采用Cck8法测定化合物最小抑菌浓度。在96孔板的第一个孔加入51.2ul稀释好的化合物，加入灭好菌的LB培养基148.8ul，吸打混匀后吸取100ul到第二个孔，再加入100ul培养基，吸打混匀后吸取100ul到第三个孔。以此类推，加到第九个孔即可，随后在每孔接种100ul备用菌液。此时，从第一孔到第九孔，浓度梯度为128ug/mL、64ug/mL、32ug/mL、16ug/mL、8ug/mL、4ug/mL、2ug/mL、1ug/mL、0.5ug/mL。第十个孔加入200ul菌液作为空白对照。然后放入37℃培养箱中培养24小时后，拿出96孔板，每孔加入10ul Cck8试剂，加完试剂后轻轻敲击培养板以混匀，以减少因试剂沾在孔壁上而带来的误差。放进37℃培养箱继续培养半小时后，观察颜色变化，记录试验结果。