在前期研究中，我们发现1号碳位置取代的β-咔啉衍生物对植物病原真菌具有突出的抑制活性。为了找到高活性的农药杀菌剂的先导化合物，我们利用酰肼与酰胺类杀菌剂的优越性能，将这两类基团引入到β-咔啉的1号碳位置，合成出一系列β-咔啉酰肼及酰胺衍生物并研究其抑菌活性。

1 材料与方法 

1.1实验材料

供测菌株：大豆细菌性斑点病菌（Pseudomonas syringae pv.glycinea），水稻白叶枯病菌（Xanthomonasoryzae oryzae pv.oryzicola），水稻细菌性条斑病菌（Xanthomonasoryzae oryzae pv.oryzae）、马铃薯环腐病菌（Clavibacter michiganense subsp.sepedonicum）、小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminisis）、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）、小麦赤霉病菌（Fusarium graminearum）、草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）、水稻恶苗病菌(Fusarium moniliforme)

活体试验植物：大豆、小麦

仪器：移液枪；高压灭菌锅；超净工作台；恒温摇床；微波炉；电子天平；超低温冰箱；磁力加热搅拌器；远红外辐射干燥箱；生化培养箱；核磁共振仪；显微熔点测定仪；旋转蒸发器；分液漏斗；层析柱；电子天平；显微熔点仪；质谱(MS)LC/MS/MS System；核磁共振波谱仪

溶剂：二甲亚砜(DMSO)；甲醇；二氯甲烷

试剂：L-色氨酸甲酯盐酸盐；1,8-二氮杂二环-双环(5,4,0)-7-十一烯；正丙醛；乙醛酸；三氟乙醛；DBU；DIPEA；EDCI；浓硫酸；氢氧化钠；氨水；稀盐酸；无水硫酸钠；溴化铜；硫粉；饱和碳酸氢钠溶液；饱和食盐水；牛肉膏，98%，阿拉丁试剂；蛋白胨，98%，阿拉丁试剂；琼脂，98%，阿拉丁试剂。

1.2化合物的合成

图2 化合物的合成路线

将0.2mL浓硫酸和10mmol L-色氨酸甲酯加入到20mL水中,然后加入12mmol乙醛酸，在常温下磁力搅拌24h。反应结束后，用1mol/L NaOH溶液调PH至8，过滤得到化合物A7-4。

将8mmol化合物A7-4溶解到20mL二甲亚砜中,加入12mmol DBU和1.6mmol溴化铜，在常温下磁力搅拌24h后，过滤得到化合物A7。

将6mmol化合物A7溶解于20mL甲醇中，加入20mL氨水，加热回流过夜。反应结束后用1mol/L HCl溶液调PH至7，过滤得到化合物C7。

在冰浴条件下，将0.5mmol化合物C7溶于20mL二氯甲烷中，依次加入0.6mmol丙胺、0.75mmol EDCI和0.1mmol DIPEA，反应半小时后，撤除冰浴，常温反应过夜。反应结束后依次用稀HCl溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗三遍。采用柱层析法纯化得到化合物4aa。

1.3生物活性测定材料和菌种制备 

在生物测定试验中，所用到的枪头、牙签、打孔器、接种环、三角瓶、培养基等均采用高温灭菌法灭菌。超净台使用前应开紫外灭菌半小时，操作中应戴手套。

1.3.1细菌菌种的活化

LB培养基配制：按照配方配制所需量的NA（LB），120℃下，灭菌20min备用。液体培养基不加琼脂。

菌种活化：从-80ºC冰箱中拿出四种细菌的甘油菌种，吸取50uL菌液在NA（LB）固体培养基上划线活化。随后放入培养箱（28ºC）培养48小时，菌落长出后，用牙签挑出单菌落放入NA（LB）液体中，放在摇床（28ºC）中摇48小时，液体充分浑浊后转接到另一NA（LB）液体培养基中培养12小时。随后，每隔2小时测一次OD值，待值为1时，取出菌液备用。

1.3.2真菌菌种的活化

PDA培养基配制：按照配方配制所需量的PDA，120℃下，灭菌20min备用。

菌种活化：将小麦全蚀病菌、油菜菌核病菌、辣椒疫霉病菌、小麦赤霉病菌、草莓灰霉病菌、水稻恶苗病菌的菌块，从斜面培养基上转移至一次性培养皿（含15ml PDA）中，放入恒温培养箱（25℃）中培养。待菌落面积占培养基总面积的1/2~3/4时，转接一次便可使用。 β-咔啉酰肼及酰胺衍生物的抑菌活性研究(3):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_206226.html