1.2.6转基因拟南芥土壤修复实验

将T3-3、空载和WT的种子种植于含有IPU的土壤中，通过观察拟南芥的生长情况及检测土壤中IPU含量来评价修复效果。所述种子事先已悬浮于40 mL 0.1%（w/v）琼脂糖溶液并在温度4℃下保存2天以完成对休眠的需要以保证种子同步萌发。将灭菌的营养土和蛭石按1:3（v/v）拌匀（有机质含量约为3%，pH值为7.2±0.2），自然风干；分别用甲醇（按照1g土加1mL甲醇的量拌药）将10000 mg/kg 的异丙隆稀释成不同浓度后均匀拌入占土壤总量10%的部分土壤中，待甲醇完全挥发后，拌入剩下未污染的土壤，使土壤中异丙隆的终浓度分别为0（土壤中拌入等体积的甲醇）、5、10和15 mg/kg；然后每个培养盆分装100 g上述土壤，放置在温室中避光2天，再将如本实施例三中方法所获得的在培养基中生长15天后大小一致的拟南芥幼苗移植于平衡后的所述土壤中，在温度20-23℃、16 h光照:8 h黑暗的光照培养箱中继续培养，分别在0、10和30天时取土壤样品，利用本实施例三中的方法通过二氯甲烷萃取和采用HPLC检测不同处理下的异丙隆含量，同时设置未种植任何植物的土壤为对照（Un）。为了防止除草剂随水迁移，每隔7天向土壤浇一次霍格兰营养液，并控制土壤含水量约为40%左右。

2 结果与分析

2.1构建植物双源表达载体

2.1.1合成ATCTP和pdmA核苷酸序列及ATCTP和pdmB核苷酸序列ATCTP核苷酸序列

合成ATCTP（拟南芥叶绿体转运肽）和pdmA核苷酸序列及ATCTP和pdmB核苷酸序列ATCTP核苷酸序列：atggcgcaagttagcagaatctgcaatggtgtgcagaacccatctcttatctccaatctctcgaaatccagtcaacgcaaatctcccttatcggtttctctgaagacgcagcagcatccacgagcttatccgatttcgtcgtcgtggggattgaagaagagtgggatgacgttaattggctctgagcttcgtcctcttaaggtcatgtcttctgtttccacggcgtgc

上述核苷酸序列由南京金斯瑞生物科技有限公司合成；合成的ATCTP和PdmA核苷酸序列的5’端及3’端连接有SnaBI酶切位点， 合成的ATCTP和PdmB核苷酸序列的5’端及3’端连接有KasI酶切位点。