引言：小麦是世界上种植面积最广的粮食作物之一。小麦赤霉病(Fusarium Head Blight，FHB)是由镰刀菌引起的小麦最主要的世界性病害之一[1]，一般在开花期极易感染[2]。而且真菌分泌的脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）等毒素积累在小麦籽粒中会降低小麦的品质，甚至造成人畜中毒[3]。选育和种植抗病品种可有效控制病害的发生。但与其它病害相比，小麦抗赤霉病种质资源匮乏；而且小麦抗赤霉病是多基因控制的复杂数量性状，容易受环境因素等影响，通过常规育种手段选育抗病品种周期长和效率低，而且在抗病育种中抗病性和丰产性一直很难结合到一起。因此，研究禾谷镰刀菌和小麦宿主互作的分子机制，以及宿主小麦细胞内病程相关基因的互作分子机制，探寻一些致病或抗病的相关基因，从而加强对赤霉病的防治便有着重要意义[4]。

VIGS技术即病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing)，是近年来发现的一种转录后基因沉默现象，可引起内源mRNA特异性降解[5，6]，进而通过基因沉默后植物表型的评估，研究该基因的功能，并可进行大规模功能基因的筛选[7]。目前VIGS技术已经广泛应用于烟草、拟南芥、马铃薯等的双子叶植物[8，9，10]以及大麦、小麦、水稻等的少数单子叶植物[11，12，13]的基因功能研究中。

实验所用小麦品种望水白是来自江苏的地方品种，高抗赤霉病，其染色体3BS上携带主效抗赤霉病位点Fhb1，在前期研究中利用快中子诱变获得该位点缺失的感赤霉病突变体NAUH117[14]；为解析望水白赤霉病抗性机制，克隆抗性相关基因，对望水白（Fhb1+）及NAUH117（Fhb1-）开花期的穗部分别接种赤霉菌，利用转录组学分析接种前后基因表达变化[15]，筛选了一个抗病候选基因受体类蛋白激酶基因TaRLK3-3B。本研究利用VIGS技术鉴定快速初步的鉴定TaRLK3-3B基因的抗赤霉病功能，可为抗赤霉病分子育种提供新的抗性基因资源。

1  材料与方法 

1．1  材料

1．1．1  植物材料   

小麦地方品种望水白：来自江苏溧阳，高抗赤霉病，含有主效抗性QTL，Fhb1；小麦品种苏麦3号：由阿夫和台湾小麦进行杂交育成，也含有Fhb1，高抗赤霉病，是公认的抗性最好的赤霉病抗源材料。

1．1．2  菌株和载体质粒   

大肠杆菌DH5α购买于南京诺唯赞公司。VIGS(virus induced gene silencing)的大麦条斑花叶病毒(Barley Stripe Mosaic Virus，BSMV)由α、β、γ三条RNA链组成，BSMV重组病毒载体α、β、γ、γ-PDS由中国科学院遗传与发育生物学研究所王道文研究员提供。

1．1．3  引物序列

VIGS_1_F1：CTAGCTAGCGCCCCACAACATCCTTCTTG；

VIGS_1_R1：CTAGCTAGCTTCTTCCTCCAGCCATCTCC

1．1．4  实验试剂   

RNA提取试剂盒购Trizol自Invitrogen公司；高保真酶Phanta® Max Super-Fidelity DNA Polymerase 购买于诺唯赞公司；pTOPO-Blunt平末端克隆试剂盒购买于Aidlab；T4连接酶、限制性内切酶等均购自TaKaRa公司；质粒大量、中量、小量抽提试剂盒购买于QIAGEN公司；2×Taq Master Mix 购买于上海近岸蛋白质科技有限公司；体外转录试剂盒购买于Promega公司。

1．2  实验方法

大麦条纹花叶病毒诱导的基因沉默（Barly Streak Mosaic Virus induced gene silencing, VIGS）。VIGS 实验参照 Wang方法。具体程序如下：

1．2．1  引物设计   

根据目标基因的正向序列设计扩增引物，左右引物的5’端均引入限制性内切酶NheІ的酶切位点以及保护性碱基，扩增其200～500bp左右片段作为外源插入片段。 利用VIGS体系研究TaRLK3-3B基因在小麦抗赤霉病中的功能(2):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_205994.html