摘    要：本实验完善了发根农杆菌K599的形态生理特征，以及提供了其分子分类数据。发根农杆菌K599属于革兰氏阴性细菌，菌落呈淡黄色，细胞形态为棒杆状，一个成熟的K599细胞长度约2μm左右。对抗生素的抗性为抗链霉素和卡那霉素，对头孢霉素较敏感。对盐（NaCl）浓度的耐受性为最大耐盐量为6%。对温度的适应性为最适生长温度为28℃。构建的系统进化树状图显示了K599与其他农杆菌菌株和相同家族（微生菌科）和类（放线菌科）的相关成员的16S rRNA基因的关系，其中与Ruegeria（KJ372486）的基因亲缘关系相对较近，而与Ahrensia（AJ582087），Pseudorhodobacter（FR821219），Stappia（AB680962）的基因亲缘关系相对较远。

Abstract：This experiment improves the morphological and physiological characteristics of Agrobacterium rhizogenes Strain K599 and provides it’s molecular classification data. A. rhizogenes K599 is a gram-negative bacterium, the colony is pale yellow, the cell morphology is rod-shaped, and a mature K599 cell is about 2 μm in length. The resistance to antibiotics is streptomycin and kanamycin, which is sensitive to cephalosporin. The salt (NaCl) concentration is tolerated with a maximum salt tolerance of 6%. The adaptability to temperature is the optimum growth temperature of 28°C. The constructed phylogenetic dendrogram shows the relationship between K599 and 16S rRNA genes of other Agrobacterium strains and related members of the same family (Microbiaceae) and genus (Amylidaceae), with those of Ruegeria (KJ372486) The phylogenetic relationship is relatively close, but the genetic relationship with Ahrensia (AJ582087), Pseudorhodobacter (FR821219) and Stappia (AB680962) is relatively distant.

关键词:发根农杆菌K599；形态生理；ITS序列；基因对比；系统进化树状图

Keyword: Agrobacterium rhizogenes Strain K599; Morphological physiology; ITS sequence; gene Blast; phylogenetic tree

目    录

目录 3

引言 4

1 材料与方法 4

  1.1 材料及仪器 4

  1.2 实验方法 4

    1.2.1 发根农杆菌K599的预处理 4

    1.2.2 显微镜观察发根农杆菌K599细胞形态 4

    1.2.3 发根农杆菌K599对不同抗生素的抗性 5

    1.2.4 发根农杆菌K599对不同盐（NaCl）浓度的耐受性 5

    1.2.5 发根农杆菌K599对不同温度的适应性 5

    1.2.6 设计ITS序列引物 5

1.2.7 发根农杆菌K599质粒DNA的提取 5

    1.2.8 PCR扩增发根农杆菌K599的ITS特征序列 6

    1.2.9 构建系统进化树状图 6

2 结果与分析 7

  2.1形态生理总结 7

  2.1 测序结果 9

  2.3系统进化树状图 10

3 讨论 10

参考文献 12

致谢 13

引言

众所周知，植物转基因技术的发展越来越迅速，越来越多地应用到人类社会，与人类息息相关。其中，应用范围最大最广和最实用的是由农杆菌介导的植物转基因技术。在转基因植物中有80%以上是由农杆菌转化而来的[1]。农杆菌主要分为两种，一种是根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens），另一种是发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）。1982年，Chilton报道发根农杆菌能诱导植物产生发状根（Hairy root），这种发状根又被称为毛状根，是由发根农杆菌所含有的Ri质粒（Root inducing plasmid）引起的，Ri质粒不仅是遗传转化的优良载体，而且可直接感染植物细胞[2]。