80 100

在每管中均加入5mL蒽酮试剂,沸水浴中10min,期间摇晃几次,结束后冰水浴冷却,620nm波长下测定吸光值。

2.1.2 蛋白质含量测定[4]

称样品0.01g,加5毫升蒸馏水并研磨,4000r/min离心10分钟,集液。残渣中加入5毫升蒸馏水,4000r/min离心10分钟,取合并后的上清液1毫升,往其中加5毫升考马斯亮蓝G-250,放置2分钟,于595nm波长下测。

蛋白质含量(mg/g)=计算得到的蛋白质含量(μg)×稀释倍数×10-3/样品质量(g)

蛋白标准曲线制作

取6支试管,按照如下所述比不同浓度的标准蛋白溶液。

管号 1 2 3 4 5 6

100μg/mL标准蛋白溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

蒸馏水/mL 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

蛋白含量/(μg/mL) 0 20 40 60 80 100

各个管均加入考马斯亮蓝G-2505mL,静置2min,于595nm波长下测。

2.2 部分代谢酶活性的测定

2.2.1 α-淀粉酶活性测定[5]

称取0.01 g样品,加入2mL蒸馏水研磨至匀浆,再用6mL蒸馏水冲洗匀浆器,倒入到试管中,于室温下置放提取液15min(其间每几分钟震荡试管一次)。离心(3000r/min)十分钟,上清移到0.1L容量瓶,定容得到淀粉酶原液。

   取3支干净试管并标记,根据下表操作。540nm波长下测。

操作项目 α-淀粉酶活力测定

1 2 3

淀粉酶原液/mL 1 1 1

置70℃水浴15min,冷却

淀粉酶稀释液/mL 0 0 0

3,5-二硝基水杨酸/mL 2 0 0

预保温,将各试管和淀粉溶液置于40℃恒温水浴中保温10min

1%淀粉溶液/mL 1 1 1

保温,在40℃恒温水浴中准确保温5min

3,5-二硝基水杨酸/mL 0 2 2

震荡均匀,置沸水中水浴5min,之后冷却,各个管取1mL并用蒸馏水稀释至5mL,1号管用于空白调零,在540nm波长下测。

α-淀粉酶活性(U/g)=计算得到的麦芽糖含量(mg)×酶原液总体积(mL)×稀释倍数/(样品质量(g)×测定所用酶液体积(mL)×反应时间(min))

以每分钟生成1 mg麦芽糖所需的酶量作为α-淀粉酶的一个酶活性单位(U),即1 U=1 mg/min。

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