4. 总结与讨论 15

1. 引言

天目铁木是桦木科铁木属植物，是浙江天目山特有的珍稀树种，目前在天目山仅现存野生植株5株，人工林200余株[1]，濒临灭绝，这是由于天目铁木的雌雄花期错落、种子具有生理后熟而难以保存以及人为的生产活动对原生植物的破坏等原因导致的[2]。目前天目铁木的天然个体中仅有一个稳定结种，人工林的多个个体在近几年虽然能够产生种子，但从未发现自然更新幼苗。

目前虽然通过扦插等无性繁殖的方式可以获得新的个体，但是遗憾的是存活率并不高。而有性繁殖时幼苗对生长条件极为严苛，不易存活，因此如果不能够采取有效的繁育措施，天目铁木可能会面临灭绝。

天目铁木种子存在相对复杂的休眠机制，有关的报道不够多，研究种子的休眠原因及解除种子休眠的方法，是一项重要的任务。目前国内外对天目种子的休眠状况研究较多，研究表明，休眠可分为环境休眠和生理休眠[3]。引起其休眠的原因大体可分解剖结构、代谢和胚自身发育状况三个方面，上述等研究结论可以为本实验提供理论支持。

本研究以天目铁木野生树和人工林种子为研究对象，检测种子中主要内源营养物质含量、代谢酶活性以及部分抗氧化酶活性，比较种子生活力强弱，以期为天目铁木的致濒机制提供理论依据，并期以利用该濒危机制去提高种子的生活力。

2. 材料与方法

2.1 部分营养物质含量的测定

2.1.1可溶性糖含量和淀粉含量测定

可溶性糖含量[4]：提取样品0.01g，加80%乙醇研磨，再加80%的乙醇冲洗研钵，共5mL，在80℃下水浴30min，待冰水浴冷却，在4000r/min下离心10min，提取上清，并向剩余残渣中加入5mL的80%乙醇，重复上述操作，合并并取合并后的上清液1mL，加5mL蒽酮试剂（0.2g蒽酮溶于0.1L80%H2SO4），沸水浴中10min，期间摇晃几次，结束后冰水浴冷却，于620nm波长下测吸光度。

可溶性淀粉含量[4]：在残渣中添加4mL蒸馏水，沸水浴15分钟。加0.4毫升9.2mol/L的高氯酸，静置15分钟，冷却后倒入5.6mL蒸馏水，10000r/min离心10分钟，取1毫升上清，5毫升蒽酮试剂，沸水浴10min，中途多次震荡，结束后冰水浴冷却，620nm波长下测定吸光值。

可溶性糖含量（mg/g）=计算得到的葡萄糖含量（μg）×稀释倍数×10-3/样品质量（g）

淀粉含量（mg/g）=计算得到的葡萄糖含量（μg）×稀释倍数×10-3/样品质量（g）

葡萄糖标准曲线制作

取6支试管，按以下表格所述配液。

管号 1 2 3 4 5 6

200μg/mL标准葡萄糖溶液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5

蒸馏水/mL 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5

葡萄糖含量/（μg/mL） 0 20 40 60