葡萄籽提取物（Grape Seed Extract，GSE）是从葡萄籽和皮中提取分离得到的一类多酚类物质，具有自由基清除能力和金属离子螯合能力[11]。GSE是一种天然的多聚体，多酚含量丰富，主要包括儿茶素、表儿茶素以及由不同数量的儿茶素或表儿茶素通过通过C4-C8或C4-C6聚合结合而成的原花青素等，其中原花青素含量最丰富，可以达到80%以上。葡萄籽中所含有的儿茶素类多酚（以及由儿茶素单体结合成的原花青素等）的A环结构可以作为RCS的加成位点，直接清除ALEs形成的前体物质。GSE已被证明有显著的抗氧化活性，对心血管疾病有预防作用，并有增强免疫、抗炎、抗癌等功效。研究发现在多种食物如加工前后的猪肉或牛肉馅饼[12,13]、面包[14]、沙拉酱[15]等都有将GSE作为抗氧化剂添加到其中。流行病学数据显示，红酒能够降低冠状动脉疾病的死亡率，而红酒和GSE一样都来源于葡萄，且富含原花青素[16]。GSE作为健康食品的原料已经被直接制成胶囊等剂型，并成为美国天然植物十大畅销品种之一，在欧美被广泛加入到各种普通食品如蛋糕、奶酪中，作为食品的营养强化剂和天然抗氧化剂以提高这些食品的安全性。GSE的结构特性使其具抗氧化能力和RCS清除能力，因而能够很好的抑制脂质氧化及其引发的蛋白损伤等。

2 材料与仪器

2.1 实验材料与试剂

新鲜屠宰的猪大排肉购于当地超市。EC、牛血清白蛋白（BSA）、6-羟基-2,5,7,8-四羟基色烷-2-羧酸（Trolox）、5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸)（DTNB）、考马斯亮蓝G250、2,4-二硝基苯肼（DNPH）、溴酚蓝（BPB）、哌嗪-1,4-二乙磺酸（PIPES）等均购于美国Sigma-Aldrich公司。乙醇、乙酸乙酯、三氯乙酸（TCA）、硫代巴比妥酸（TBA）、氯化铁、磷酸二氢钾、双氧水、硫酸铜、酒石酸钾钠、盐酸胍、氯化镁、脲等其他常规化学试剂均为分析纯，购于国药化学试剂有限公司。十二烷基硫酸钠（SDS）、30%聚丙烯酰胺（Acr-Bis）、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、β-巯基乙醇（β-ME）、过硫酸铵（APS）、四甲基乙二胺（TEMED）、甘氨酸等均为电泳级购于生工生物工程股份有限公司公司。

2.2 实验仪器与设备

AR124CN电子天平，常州奥豪斯仪器有限公司；TU-10数显式恒温加热器，上海一恒科学仪器有限公司；ST300pH计，常州奥豪斯仪器有限公司；5430小型离心机，德国Eppendorf公司；5810 R离心机，生工生物工程（上海）股份有限公司；WH-866涡旋振荡器，太仓华利达实验设备有限公司；DK-S26电热恒温水浴锅，上海精宏实验仪器有限公司；Varioskan Flash多功能酶标仪，德国Thermo公司；XHF-D绞肉机，宁波新芝生物科技股份有限公司；PowerPacTM Basic 电泳仪，美国Bio-Rad公司；TS-100B恒温摇床，上海天呈实验仪器制造有限公司。

3 实验方法

3.1 猪肉肌原纤维蛋白的提取

MP的提取参照Park等[17]的提取操作并做了部分的修改。整个提取过程于冰上完成：将猪大排肉可见脂肪及结缔组织剔除并切成小块，用绞肉机绞碎，称6 g加入四倍体积（v/w）的分离缓冲液（10 mM Na3PO4，0.1 M NaCl，2 mM MgCl2，1 mM EGTA，pH 7.0），于低速档位搅拌1 min（4次/15 s）。形成的匀浆经离心（2000 g，15 min，4 °C）后弃上清，所得沉淀再次加入四倍体积分离缓冲液，重复上述步骤共三次。此后所得沉淀加入四倍体积0.1 M NaCl溶液，震荡摇匀，离心（2000 g，15 min，4 °C）后弃上清，所得沉淀再次加入四倍体积0.1 M NaCl溶液，重复上述步骤三次。在第三次离心之前将均液经四层纱布（100目）过滤以除去残留的结蹄组织等，0.1 M HCl 调节pH为6.25后离心，所得白色膏状沉淀即为MP，MP置于离心杯中并保存于碎冰中，48小时内使用。蛋白浓度的测定采用双缩脲法测定。 葡萄籽提取物对猪肉肌原纤维蛋白氧化生成ALEs的抑制作用研究(3):http://www.chuibin.com/shiping/lunwen_205671.html