采用随机方法，选取饱满健康的一年生黑麦草EI与EF种子各4×35粒，均匀摆放于直径15cm的培养皿内，进行发芽，每个培养皿采用不同浓度的Cd的处理液。Cd处理液浓度分别为0、50、100、200μmol/L，处理液由5mL去离子水配置。培养皿用封口膜密封放入25℃暗光组培室中培养4天，培养期间进行计数，记录一年生黑麦草种子的萌发数，第5天取出见光萌发。5天后测量胚芽、胚根、生物量。

1.2.2 一年生黑麦草幼苗的培养与处理

一年生黑麦草作为供试植物，种子使用前用体积百分含量为30%的过氧化氢浸泡10-15 min 以杀死种子表面的杂菌，然后用无菌水冲洗，待用。

随机选取饱满的一年生黑麦草EI与EF种子各300粒进行种植培养，每盆15株。胁迫处理30天，期间注意保持土壤水分。本实验考虑内生真菌和Cd胁迫2个因素，感染内生真菌(EI)与未感染(EF)，Cd胁迫浓度设0、20、40、80mg/kg，每个处理设4个重复，自然光照。

实验土壤选自牌楼，过孔径为1cm的滤筛，将Cd按照0、20、40、80mg/kg的浓度配置成溶液，均匀混入土壤内。

30天后每周测定株高、总分蘖数、叶片数，45天后测定叶绿素荧光含量、可溶性糖含量、丙二醛含量。

1.2.2.1 测定项目及方法

1.2.2.1.1 株高、分蘖数、叶片数

30天后，每周测定各浓度株高、总分蘖数、叶片数。

1.2.2.1.2 叶绿素含量

使用叶绿素仪测定标记植株叶片的叶绿素含量。

1.2.2.1.3 可溶性糖含量

取6支20ml试管，逐一编号，配制不同浓度标准葡萄糖溶液作为标准溶液。在每个试管中都加入0.5mL蒽酮试剂，缓慢地加入5mL浓硫酸，轻轻摇匀，置沸水浴中煮沸10分钟，进行冷却，直至室温，在620nm波长下进行比色，测得各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。

参照李合生等的方法测定可溶性含量[9]。利用取新鲜干净植物叶片，剪碎混匀，称取0.1g，共3份。依次放入3支刻度试管中，做好标记，各加入5-10mL蒸馏水，塑料薄膜封口，沸水中提取30min（提取2次），过滤定容至25mL。吸取样品液于试管中3次，加1mL水和0.5mL蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓硫酸），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5mL蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值，查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）[10]。

1.2.2.1.4 丙二醛（MDA）含量

参照蔡庆生等的方法测定丙二醛(MDA)含量。称取 0.5 g植物（根、叶），加入少许石英砂和2mL10%三氯乙酸（TCA），研磨成匀浆，再加8mL10%TCA进一步研磨，匀浆在2000g离心10min。取上清液，作为提取液，量体积。吸取上清液2ml（对照加2ml蒸馏水），加2ml0.6％TBA，混合沸水水浴15min，迅速冷却然后再离心1次。取上清分别测定上清液在450nm、532nm、600nm处吸光度值。

C( 内生真菌提高黑麦草耐镉处理的研究(3):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_206474.html