(2)在泡沫盒中倒入适量液氮,剪下对应的拟南芥叶片材料于1.5ml EP管中,做好标记,然后迅速将EP管放入液氮中。
(3)在液氮中用研磨棒将拟南芥叶片研磨成粉末,迅速加入1ml Trizol,剧烈摇晃,将样品弹起并使其均匀,室温静置5-10分钟。
(4)12000 r 4℃离心15分钟,将上清液吸取大约600 ul 加入新的EP管中,加入200 ul 氯仿,强力震荡15秒,室温放置2-3分钟,之后分为有机相与水相,RNA在水相。
(5)12000 r 4℃离心15分钟,取新的1.5ml EP管,做好对应的标记,取400 ul 左右上清到新的EP管中,然后分别加入500 ul 异丙醇,室温下静置10分钟。
(6)12000 r 4℃离心15分钟,小心弃去上面的清液后,在纸上扣干,留下白色沉淀。
(7)用75%乙醇1ml加入各有沉淀的EP管中,乙醇由DEPC水溶解,7500 r、4℃离心10分钟,弃去上清后,在纸上扣干。
(8)12000 r 4℃离心1分钟,用枪吸干水分,吹干沉淀直至呈现透明状态。
(9)加入20ulDEPC水溶解沉淀,用移液枪吸打混匀,然后60℃干浴锅中加热10分钟,每3分钟震荡一次。
(10)取1ul在nanodrop上测浓度,-80℃保存RNA。
拟南芥hpr突变体鉴定及其对光环境的响应(5):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_206220.html
