登录SMART网站（http://smart.embl-heidelberg.de/），选择normal格式，输入NCBI网站上查询的ZFP157蛋白序列，获得预测结构域。

下载DNAman软件，新建文件夹输入编码序列，单击Seq,选择Yes。单击翻译图标，将出现一个新的对话框，选择Frame1、One letter后点击OK，弹出氨基酸序列，即为翻译的结果。

1.4  耐盐性鉴定

于30摄氏度环境下将水稻种子在自来水中浸泡催芽，至种子露白后播种于剪去尖型底部的96孔PCR板上，经过三周的水培养，移苗至浓度为200mMNaCl的水溶液中培养3天,对叶片变化进行观察并记录。待野生型水稻幼苗叶尖出现发黄卷曲萎缩表型后，再移苗至水溶液中进行恢复培养9天，对幼苗存活率进行统计。

1.5  Quantitative Real-time PCR 分析

将水稻肌动蛋白Actin作为内参基因，设计ZFP157的特异引物，根据源自Roche公司的Fast Start Universal SYBR Green Master（ROX）操作说明书实施实时荧光定量PCR分析。所得实验结果根据2-ΔΔCT法（Livak and Schmittgen, 2001）进行数据处理和分析。Real-time PCR采用Roche 480实时定量聚合酶定量反应系统，反应条件为：95℃5 min，95℃10 sec，60℃15 sec，72℃30 sec，40个循环。

1.6  植物总DNA的提取

CTAB法提取植物总DNA。

1) 加液氮充分研磨，至水稻样品呈现粉末状。

2) 添加600微升2成CTAB缓冲液（2%CTAB；0.2%β-琉基乙醇；20mM EDTA；100 mM Tris-Cl，pH=8.0；1.4M NaCl），在65℃环境下充分颠倒混匀后水浴30分钟，其间颠倒混匀多次以保证粉末充分溶解于缓冲液。

3) 加入相等体积的氯仿/异丙醇（24:1），充分混合。65℃环境下水浴10分钟。

4) 12,000rpm离心10分钟，吸取上清液至1.5毫升的离心管，添加相同体积的预冷二甲基甲醇，充分摇动均匀后放置于-20摄氏度冰箱，冷冻沉淀2小时。

5) 12,000rpm离心2分钟，弃上清。

6) 70％乙醇洗涤两次，弃乙醇，自然吹干或烘干。

7) 加入适量双蒸馏水溶解。放置于-20摄氏度的冰箱中保存备用。

1.7  总RNA的提取以及cDNA第一链的合成

按照Invitrogen公司Trizol试剂说明书进行植物总RNA的提取，采用1%琼脂糖凝胶电泳分析总RNA的质量以及浓度，筛选符合要求的总RNA，进行互补脱氧核糖核酸第一链的合成，实验操作依据南京诺维赞公司提供的反转录系统操作手册完成。

1） 加入液态的氮气充分研磨，至样品呈现细腻粉末状。

2） 加入1毫升预冷的总RNA抽提试剂Trizol，充分振荡，混匀后冰上放置5分钟。

3） 12,000 rpm 离心10分钟（4摄氏度离心机），上下分层，吸取上清。

4） 加入200微升水饱和酚以及相同体积的三氯甲烷，混匀后室温静置5分钟。

5） 12,000 rpm 离心 10分钟，将上层水相移液至1.5毫升的离心管中，加入相同体积的预冷二甲基甲醇，充分混合均匀，然后放至-20摄氏度冰箱冷冻沉淀，保持15分钟。

6） 12,000 rpm 离心 10分钟，弃上层清液。75％乙醇（常用作消毒剂）洗涤后置冰上风干。

7） 添加适量焦碳酸二乙酯处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水溶解，利用1%琼脂糖凝胶电泳分析总RNA的质量以及浓度，-80摄氏度冰箱中保存备用。 水稻锌指蛋白ZFP157抗盐性机理的初步研究(3):http://www.chuibin.com/shengwu/lunwen_206217.html